標準編號:	GB 4789.2-2010
中文名稱:	食品微生物學檢驗 菌落總數測定
英文名稱:	Food Microbiological Examination: Aerobic Plate Count
中標分類:	C53    食品衛生
行業分類:	GB    國家標準
發布機構:	衛生部
發布日期:	2010-03-26
實施日期:	2010-6-1
標準狀態:	superseded
被新標準替代:	GB 4789.2-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定
被替代日期:	2017-6-23
替代舊標準:	GB/T 4789.2-2008 食品衛生微生物學檢驗 菌落總數測定
翻譯語言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符數:	4,000 字
翻譯價格(元):	100.0
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Foreword Codeofchina.com is in charge of this English translation. In case of any doubt about the English translation, the Chinese original shall be considered authoritative. This standard is the substitute of GB/T 4789.2-2008 "Microbiological Examination of Food Hygiene-Aerobic Plate Count". The main amendments of this standard comparing with GB/T 4789.5-2008 are as follows: ——The Chinese and English names of this standard were amended; ——The explanation in aerobic plate count calculation formula was amended; ——Culture medium and reagent were amended; ——The second method: PetrifilmTM aerobic plate count method was deleted. The annex A of this standard is normative. The issue condition of all previous editions of standards substituted by this standard is: ——GB 4789.2-1984, GB 4789.2-1994, GB/T 4789.2-2003, GB/T 4789.2-2008. National Food Safety Standard Food Microbiological Examination: Aerobic Plate Count 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定 1 Scope This standard specifies examination method of aerobic plate count in food. This standard is applicable to the examination of aerobic plate count in food. 2 Terms and Definitions 2.1 Aerobic plate count It refers to the total microbes colonies amount in per g or mL of specimen after food specimen has been treated and cultured under certain conditions (such as culture medium, culture temperature and incubation time). 3 Equipments and Materials Except conventional sterilization in microbiology Lab. and culture equipments, other equipments and materials are as follows: 3.1 Thermostatic incubator36℃±1℃, 30℃±1℃. 3.2 Refrigerator: 2℃~5℃. 3.3 Thermostatic water tank: 46±1℃. 3.4 Scale: sensibility is 0.1 g. 3.5 Homogenizer. 3.6 Oscillator. 3.7 Sterile suckers: 1mL (with 0.01mL scale), 10mL (with 0.1 scales) or micropipette and suction head. 3.8 Sterile conical flasks: capacities are 250mL and 500mL. 3.9 Sterile culture dish: diameter is 90mm. 3.10 Acidimeter, pH color comparison tube or short-range pH paper. 3.11 Magnifier or/and colony counter. 4 Culture Medium and Reagents 4.1 Plate count agar culture medium: see A.1 in Annex A. 4.2 Phosphate buffer: see A.2 in Annex A. 4.3 Sterile physiological saline: see A.3 in Annex A.

Foreword 1 Scope 2 Terms and Definitions 3 Equipments and Materials 4 Culture Medium and Reagents 5 Examination Procedures 6 Operation Steps 7 Results and Reports Annex A (Normative) Culture Medium and Reagent

前 言 本標準代替GB/T 4789.2-2008《食品衛生微生物學檢驗 菌落總數測定》。 本標準與GB/T 4789.2-2008相比，主要修改如下： ——修改了標準的中英文名稱； ——修改了菌落總數計算公式中的解釋； ——修改了培養基和試劑； ——刪除了第二法 菌落總數PetrifilmTM測試片法。 本標準的附錄A是規范性附錄。 本標準所代替標準的歷次版本發布情況為： ——GB 4789.2-1984、GB 4789.2-1994、GB/T 4789.2-2003、GB/T 4789.2-2008。 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定 1 范圍 本標準規定了食品中菌落總數（Aerobic plate count）的測定方法。 本標準適用于食品中菌落總數的測定。 2 術語和定義 2.1 菌落總數 aerobic plate count 食品檢樣經過處理，在一定條件下（如培養基、培養溫度和培養時間等）培養后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數。 3 設備和材料 除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下： 3.1 恒溫培養箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒溫水浴箱：46 ±1 ℃。 3.4 天平：感量為 0.1 g。 3.5 均質器。 3.6 振蕩器。 3.7 無菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。 3.8 無菌錐形瓶：容量 250 mL、500 mL。 3.9 無菌培養皿：直徑 90 mm。 3.10 pH計或 pH比色管或精密 pH試紙。 3.11 放大鏡或/和菌落計數器。 4 培養基和試劑 4.1 平板計數瓊脂培養基：見附錄 A 中 A.1。 4.2 磷酸鹽緩沖液：見附錄 A中 A.2。 4.3 無菌生理鹽水：見附錄 A中 A.3。 5 檢驗程序 菌落總數的檢驗程序見圖1。 檢樣 25g(mL)樣品+225mL稀釋液，均質 ↓ 10系列稀釋 ↓ 選擇2個~3個適宜稀釋度的樣品勻液， 各取1mL分別加入無菌培養皿內 ↓ 每皿中加入15mL~20mL 平板計數瓊脂培養基，混勻 ↓ 培養 ↓ 計算各平板菌落數 ↓ 計算菌落總數 ↓ 報告 圖 1 菌落總數的檢驗程序 6 操作步驟 6.1 樣品的稀釋 6.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000 r/min～10000 r/min 均質 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的樣品勻液。 6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 6.1.3 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有 9 mL 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。 6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次1 mL無菌吸管或吸頭。 6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計，選擇 2 個～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行 10 倍遞增稀釋時，吸取 1 mL 樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取 1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。 6.1.6 及時將 15 mL～20 mL 冷卻至 46 ℃的平板計數瓊脂培養基（可放置于 46 ±1 ℃℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。 6.2 培養 6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉，36 ±1 ℃℃培養48 h±2 h。水產品 30 ±1 ℃℃培養 72 h±3 h。 6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基（約 4 mL），凝固后翻轉平板，按 6.2.1 條件進行培養。 6.3 菌落計數 可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。 6.3.1 選取菌落數在 30 CFU～300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數，大于 300 CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。 6.3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以 2，代表一個平板菌落數。 6.3.3 當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。 7 結果與報告 7.1 菌落總數的計算方法 7.1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每 g（mL）樣品中菌落總數結果。 7.1.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按公式（1）計算： N=Σc/(n1+0.1n2)d…………………………………（1） 式中： N——樣品中菌落數； ∑C——平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和； n1——第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數； n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）平板個數； d——稀釋因子（第一稀釋度）。 示例： 稀釋度 1：100（第一稀釋度） 1：1000（第二稀釋度） 菌落數（CFU） 232，244 33，35 N=Σc/(n1+0.1n2)d = = =24727 上述數據按7.2.2數字修約后，表示為25000或2.5×104。 7.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數均大于 300 CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。 7.1.4 若所有稀釋度的平板菌落數均小于 30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。 7.1.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于 1乘以最低稀釋倍數計算。 7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在30 CFU～300 CFU之間， 其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU時，則以最接近 30 CFU或 300 CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。 7.2 菌落總數的報告 7.2.1 菌落數小于 100 CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告。 7.2.2 菌落數大于或等于 100 CFU 時，第 3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2位數字，后面用 0 代替位數；也可用 10 的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。 7.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延。 7.2.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。 7.2.5 稱重取樣以 CFU/g 為單位報告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報告。 附錄A （規范性附錄） 培養基和試劑 A.1 平板計數瓊脂（plate count agar，PCA）培養基 A.1.1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 瓊 脂 15.0 g 蒸餾水 1000 mL pH 7.0±0.2 A.1.2 制法 將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH。分裝試管或錐形瓶，121 ℃高壓滅菌15 min。 A.2 磷酸鹽緩沖液 A.2.1 成分 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 34.0 g 蒸餾水 500 mL pH 7.2 A.2.2 制法 貯存液：稱取34.0 g的磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH，用蒸餾水稀釋至1 000 mL后貯存于冰箱。 稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，分裝于適宜容器中，121 ℃高壓滅菌15 min。 A.3 無菌生理鹽水 A.3.1 成分 氯化鈉 8.5 g 蒸餾水 1 000 mL A.3.2 制法 稱取8.5ｇ氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓滅菌15 min。