標準編號:	GB/T 18872-2017
中文名稱:	飼料中維生素K3的測定 高效液相色譜法
英文名稱:	Determination of vitamin k3in feeds-High performance liquid chromatography
中標分類:	B46    畜禽飼料與添加劑
行業(yè)分類:	GB    國家標準
ICS分類:	65.120 65.120    飼料 65.120
發(fā)布機構:	中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局 中國國家標準化管理委員會
發(fā)布日期:	2017-11-01
實施日期:	2018-5-1
標準狀態(tài):	valid
替代舊標準:	GB/T 18872-2002 飼料中維生素K3的測定 高效液相色譜法
翻譯語言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符數(shù):	11000 字
翻譯價格(元):	720.0
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Determination of vitamin K3 in feeds - High performance liquid chromatography 1 Scope This standard specifies a high performance liquid chromatography for the determination of vitamin K3 (menadione sodium bisulfite, menadione nicotinamide bisulfite and menadione dimethylpyrimidinol bisulfite, calculated in menadione) in feeds. This standard is applicable to the determination of vitamin K3 in formula feed, concentrate, additive premixed feed and concentrate supplement. The limit of quantification of the method is 0.4mg/kg. 2 Normative references The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies. GB/T 603 Chemical reagent - Preparations of reagent solutions for use in test methods GB/T 6682 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods GB/T 14699.1 Feeding stuffs - Sampling GB/T 20195 Animal feeding stuffs - Preparation of test samples 3 Principle The test samples are extracted by trichloromethane and sodium carbonate solution and then transformed into free menadione, separated by reversed-phase C18 column, detected by UV detector, and quantified by external standard method. 4 Reagents and materials Unless otherwise specified, all reagents in this standard are analytically-pure reagents, the test water shall meet the requirements Grade III water in GB/T 6682, the chromatography water shall meet the requirements Grade I water in GB/T 6682, and the solution is prepared in accordance with GB/T 603. 4.1 Trichloromethane. 4.2 Methanol: chromatographically pure. 4.3 Anhydrous sodium carbonate. 4.4 Sodium carbonate solution: c=1mol/L. Weigh 10.6g of anhydrous sodium carbonate, add 100mL of water to dissolve and shake well. 4.5 Anhydrous sodium sulfate. 4.6 Diatomite. 4.7 Mixture of diatomite and anhydrous sodium sulfate: weigh 3g of diatomite and 20g of anhydrous sodium sulfate and mix them well. 4.8 Menadione standard: with content≥96%.

Foreword i 1 Scope 2 Normative references 3 Principle 4 Reagents and materials 5 Apparatuses 6 Sampling and sample preparation 7 Analytical procedures 8 Result calculation 9 Repeatability Annex A (Informative) Examples of labeled amount and weighing amount of feed samples and dilution factor of menadione extract Annex B (Informative) Chromatogram of menadione standard solution

飼料中維生素K3的測定 高效液相色譜法 1 范圍 本標準規(guī)定了飼料中維生素K3（亞硫酸氫鈉甲萘醌、亞硫酸氫煙酰胺甲萘醌、二甲基嘧啶醇亞硫酸甲萘醌，以甲萘醌計）含量測定的高效液相色譜方法。 本標準適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料和精料補充料中維生素K3的測定。方法的定量限為0.4 mg／kg。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB／T 603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備 GB／T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 GB／T 14699.1 飼料 采樣 GB／T 20195 動物飼料 試樣的制備 3 原理 試樣經(jīng)三氯甲烷和碳酸鈉溶液提取并轉化成游離甲萘醌，經(jīng)反相C18柱分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。 4 試劑和材料 除另有說明外，本標準所有試劑均為分析純試劑，試驗用水符合GB／T 6682中三級用水規(guī)定，色譜用水符合GB／T 6682中一級用水規(guī)定，溶液按照GB／T 603配制。 4.1 三氯甲烷。 4.2 甲醇：色譜純。 4.3 無水碳酸鈉。 4.4 碳酸鈉溶液：c＝1 mol／L，稱取無水碳酸鈉（4.3）10.6 g，加100 mL水溶解，搖勻。 4.5 無水硫酸鈉。 4.6 硅藻土。 4.7 硅藻土和無水硫酸鈉混合物：稱取3g硅藻土與20g無水硫酸鈉混勻。 4.8 甲萘醌標準品：含量≥96％。 4.9 甲萘醌標準貯備液：稱取甲萘醌標準品（4.8）約50 mg（精確至0.000 01 g）于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，稀釋至刻度，混勻。該貯備液濃度約為500μg／mL，－18℃保存，有效期一年。 4.10 甲萘醌標準工作液：準確吸取1.00 mL甲萘醌標準貯備液（4.9）于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，稀釋至刻度，混勻。該工作液濃度約為5μg／mL，－18℃保存，有效期3個月。 5 儀器和設備 5.1 實驗室常用儀器設備。 5.2 天平，感量0.001 g。 5.3 天平，感量0.0001g。 5.4 天平，感量0.000 01g。 5.5 旋轉振蕩器，200r／min。 5.6 離心機：不低于5 000 r／min（相對離心力為2 988 g ）。 5.7 氮吹儀（或旋轉蒸發(fā)儀）。 5.8 高效液相色譜儀，帶紫外可調(diào)波長檢測器（或二極管矩陣檢測器）。 6 采樣和試樣制備 按照GB／T 14699.1抽取有代表性的飼料樣品，用四分法縮減取樣。 按照GB／T 20195制備試樣，磨碎，全部通過0.25mm孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?7 分析步驟 警示——因維生素K3對空氣和紫外光具敏感性，而且所用提取劑三氯甲烷溶液有一定毒性，所以全部操作均應避光并在通風櫥內(nèi)進行。 7.1 試樣溶液的制備 稱取維生素預混合飼料0.25 g～0.5 g（精確至0.000 1 g）或復合預混合飼料1 g或濃縮飼料5 g（精確至0.001 g）、 配合飼料、精料補充料5 g～10 g（精確至0.001 g），置入100 mL具塞錐形瓶中，準確加入50mL三氯甲烷（4.1）放在旋轉振蕩器（5.5）旋轉振蕩2min。加5mL碳酸鈉溶液（4.4）旋轉振蕩3min。再加5g硅藻土和無水硫酸鈉混合物（4.7），于旋轉振蕩器上振蕩30min，然后用中速濾紙過濾（或移入離心管，5 000 r／min離心10 min）。 依據(jù)樣品預期量、稱樣量和提取液量確定分取量（參見表A.1），準確吸取適量三氯甲烷提取液（V2），用氮氣吹干（或40℃旋轉減壓蒸干）。用甲醇（4.2）溶解，定容（V3），使試樣溶液濃度為每毫升含甲茶醌0.1μg～5μg。通過0.45μm有機濾膜過濾，用于高效液相色譜儀分析。 7.2 測定 7.2.1 參考色譜條件 色譜柱：C18型柱，長150 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒度5μm，或性能類似的分析柱； 流動相：甲醇＋水（75＋25）； 流速：1.0 mL／min； 柱溫：室溫； 進樣量：5μL～20μL； 檢測波長：251 nm。 7.2.2 定量測定 依次注入相應的甲萘醌標準工作液（4.10）和試樣溶液（7.1），得到色譜峰面積響應值，用外標法定量測定，甲萘醌標準溶液色譜圖參見圖B.1。 8 結果計算 試樣中甲萘醌的含量X，以甲萘醌在樣品中的質量分數(shù)表示，單位為毫克每千克（mg／kg），按式（1）計算： （1） 式中： P1——試樣溶液峰面積值； V1——提取液的總體積，單位為毫升（mL）； V3——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）； ρ——甲萘醌標準工作液濃度，單位為微克每毫升（μg／mL）； P2——甲萘醌標準工作液峰面積值； m——試樣質量，單位為克（g）； V2——從提取液（V1）中分取的溶液體積，單位為毫升（mL）。 注：飼料中維生素K3的添加劑有亞硫酸氫鈉甲萘醌、亞硫酸氫煙酰胺甲萘醌和二甲基嘧啶醇亞硫酸甲萘醌，與甲萘醌之間的轉換系數(shù)為：1mg的甲萘醌相當于1.9182mg的亞硫酸氫鈉甲萘醌；1mg的甲萘醌相當于2.186mg的亞硫酸氫煙酰胺甲萘醌；1mg的甲萘醌相當于2.198mg的二甲基嘧啶醇亞硫酸甲萘醌。 測定結果用平行測定的算術平均值表示，計算結果保留3位有效數(shù)字。