標準編號:	GB 1903.43-2020
中文名稱:	食品安全國家標準 食品營養強化劑 氰鈷胺
英文名稱:	National food safety standard - Food nutritional fortification substance - Cyanocobalamin cobione
中標分類:	X09    衛生、安全、勞動保護
行業分類:	GB    國家標準
發布機構:	國家衛生健康委員會 國家市場監督管理總局
發布日期:	2020-09-11
實施日期:	2021-3-11
標準狀態:	valid
翻譯語言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符數:	11000 字
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Codeofchina.com is in charge of this English translation. In case of any doubt about the English translation, the Chinese original shall be considered authoritative. National food safety standard - Food nutrition enhancer - Cyanocobalamin 1 Scope This standard is applicable to cyanocobalamin, a food nutrition enhancer, which is obtained by transformation and crystallization of fermentation broth containing cobalamin produced by microbial fermentation. 2 Molecular formula, structural formula and relative molecular mass 2.1 Molecular formula C63H88CoN14O14P 2.2 Structural formula 2.3 Relative molecular mass Cyanocobalamin: 1355.38 (according to the international relative atomic mass in 2018) 3 Technical requirements 3.1 Sensory requirements Sensory requirements shall meet those specified in Table 1. Table 1 Sensory requirements Item Requirement Inspection method Color and luster Dark red Take a proper amount of sample and put it into a clean and dry white porcelain dish, and observe its color and luster as well as state in natural light State Crystalline particles or powder 3.2 Physical and chemical indexes Physical and chemical indexes shall meet those specified in Table 2. Table 2 Physical and chemical indexes Item Index Inspection method Content of cyanocobalamin (calculated by dry basis), ω/% 96.0~102.0 Annex A.4 Loss on drying, ω/% ≤ 12.0 Annex A.5 Related substances, ω/% ≤ 2.0 Annex A.6 Acetone/% ≤ 0.5 Annex A.7 Lead (Pb)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB 5009.75 or GB 5009.12 Total arsenic (calculated by As)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB5009.76 or GB5009.11 Note: Commercial products of cyanocobalamin (vitamin B12) shall be made of cyanocobalamin meeting the requirements of this standard, and added with necessary food materials and/or food additives as auxiliary materials with the mass, range and dosage meeting the relevant requirements of corresponding national food safety standards.

1 Scope 2 Molecular formula, structural formula and relative molecular mass 3 Technical requirements Annex A Inspection methods Annex B Infrared spectrogram of cyanocobalamin standard Annex C Gas chromatogram of acetone

中華人民共和國國家標準 GB 1903.43—2020 食品安全國家標準 食品營養強化劑 氰鈷胺 2020-09-11發布 2021-03-11實施 中華人民共和國國家衛生健康委員會 國家市場監督管理總局 發布 食品安全國家標準 食品營養強化劑 氰鈷胺 1 范圍 本標準適用于以微生物發酵生成含鈷胺素的發酵液，經轉化和結晶得到的食品營養強化劑氰鈷胺。 2 分子式?結構式和相對分子質量 2.1 分子式 C63H88CoN14O14P 2.2 結構式 2.3 相對分子質量 氰鈷胺：1355.38(按2018年國際相對原子質量) 3 技術要求 3.1 感官要求 感官要求應符合表1的規定。 表1 感官要求 項目 要 求 檢驗方法 色澤 暗紅色 取適量試樣置于清潔?干燥的白瓷盤中，在自然光線下，觀察其色澤和狀態 狀態 結晶狀顆粒或粉末 3.2 理化指標 理化指標應符合表2的規定。 表2 理化指標 項目 指標 檢驗方法 氰鈷胺含量(以干基計)，ω/% 96.0~102.0 附錄A.4 干燥減量，ω/% ≤ 12.0 附錄A.5 有關物質，ω/% ≤ 2.0 附錄A.6 丙酮/% ≤ 0.5 附錄A.7 鉛(Pb)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB5009.75或GB5009.12 總砷(以As計)/(mg/kg) ≤ 1.0 GB5009.76或GB5009.11 注：商品化的氰鈷胺(維生素B12)產品應以符合本標準的氰鈷胺為原料，添加工藝所必需的食品原料和/或食品添加劑作為輔料，其質量?范圍和使用量應符合相應的食品安全國家標準的規定。 附 錄 A 檢驗方法 A.1 警示 本標準的檢驗方法中使用的部分試劑具有毒性或者腐蝕性，操作時應采取適當的安全和防護措施。 A.2 一般規定 本標準除另有規定外，所用試劑的純度應為分析純，所用標準滴定溶液?雜質測定用標準溶液?制劑及制品，應按GB/T 601?GB/T 602?GB/T 603的規定制備，實驗用水應符合GB/T 6682中三級水的規定。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。 A.3 鑒別試驗 A.3.1 試劑和材料 A.3.1.1 丙酮。 A.3.1.2 三氯甲烷。 A.3.1.3 乙醚。 A.3.1.4 鹽酸。 A.3.1.5 乙酸鈉。 A.3.1.6 溴化鉀。 A.3.1.7 氟化鈉。 A.3.1.8 硫酸氫鉀。 A.3.1.9 次磷酸。 A.3.1.10 酚酞指示劑。 A.3.1.11 乙酸(1mol/L)。 A.3.1.12 氫氧化鈉溶液(100g/L)：稱取10g氫氧化鈉，加水溶解并定容至100mL。 A.3.1.13 氫氧化鈉溶液(20g/L)：稱取1g氫氧化鈉，加水溶解并定容至50mL。 A.3.1.14 1-亞硝基-2-萘酚-3，6-二磺酸鈉溶液(2g/L)：稱取0.1g 1-亞硝基-2-萘酚-3，6-二磺酸鈉，緩緩加水溶解并定容至50mL。 A.3.1.15 硫酸溶液(1+7)：取70mL 水，緩緩注入10mL 硫酸，混勻。 A.3.1.16 硫酸亞鐵銨飽和溶液：稱取42g六水合硫酸亞鐵銨，加水溶解并定容至100mL。 A.3.2 儀器和設備 A.3.2.1 天平：感量0.0001g。 A.3.2.2 坩堝。 A.3.2.3 蒸餾裝置。 A.3.2.4 紫外可見分光光度計。 A.3.2.5 紅外光譜儀。 A.3.3 鑒別方法 A.3.3.1 溶解性 略溶于水和乙醇，不溶于丙酮?三氯甲烷或乙醚。 A.3.3.2 紫外鑒別 準確稱取30mg試樣于1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，采用紫外-可見分光光度計測定，在吸收譜上應出現最大峰278nm±1nm?361nm±1nm 和550nm±2nm。361nm 波長處的吸光度與278nm 波長處的吸光度的比值應為1.70~1.90。361nm 波長處的吸光度與550nm 波長處的吸光度的比值應為3.15~3.40。 A.3.3.3 鈷原子鑒別 取約1mg試樣，加硫酸氫鉀約50mg，置坩堝中，灼燒至熔融，放冷，用玻璃棒搗碎，加3 mL 水，煮沸使溶解，加酚酞指示劑1滴，混勻，滴加氫氧化鈉溶液(A.3.1.12)至顯淡紅色后，加500 mg乙酸鈉?0.5mL 乙酸和0.5mL1-亞硝基-2-萘酚-3，6-二磺酸鈉溶液，立即顯現紅色或橙紅色，加鹽酸0.5mL，煮沸1min，顏色應不消失。 A.3.3.4 氰離子鑒別 移取約5mg氰鈷胺試樣于盛有5mL 水的50mL 蒸餾燒瓶中，蒸餾燒瓶連接一個短的?水冷卻的垂直冷凝裝置，冷凝裝置出口端浸入到盛有1mL 氫氧化鈉溶液(A.3.1.13)的測試管中。樣品溶解于蒸餾燒瓶中后，加入2.5mL 次磷酸，連接好冷凝裝置，緩慢加熱煮沸10 min，收集1 mL 蒸餾液于測試管中。測試管中加入4滴冷的?硫酸亞鐵銨飽和溶液，輕搖，加入30 mg氟化鈉，加熱至沸騰，立即加入幾滴硫酸溶液至溶液變澄清，再加入3滴~5滴硫酸溶液，數分鐘內溶液變成藍色至藍綠色。 A.3.3.5 紅外鑒別 將溴化鉀壓片試樣的譜圖與氰鈷胺標準品的紅外光譜圖(見附錄B 中圖B.1)比較，兩者應基本一致。 A.4 氰鈷胺含量 A.4.1 儀器和設備 A.4.1.1 天平：感量0.0001g。 A.4.1.2 紫外分光光度計。 A.4.2 分析步驟 精確稱取約0.025g(精確至0.0001g)干燥試樣于1000mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻得到試樣溶液。用紫外可見分光光度計測定。以水作空白，采用1cm 比色皿在361nm 處測定試樣溶液吸光度值。 A.4.3 結果計算 氰鈷胺含量(以干基計)的質量分數ω1，按式(A.1)計算，以%表示。 (A.1) 式中： A——氰鈷胺紫外吸光值； 207——氰鈷胺的標準百分吸收系數( )； V——試樣定容的體積，單位為毫升(mL)； m——試樣的質量(以干基計)，單位為克(g)。 實驗結果以平行測定結果的算術平均值為準，保留一位小數。 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于算術平均值的2.0%。 A.5 干燥減量 A.5.1 方法原理 干燥減量是指試樣在105 ℃±2 ℃溫度下干燥后，失去水分及其他揮發性物質的質量與試樣質量之比，用百分數表示。 A.5.2 儀器和設備 A.5.2.1 天平：感量0.0001g。 A.5.2.2 稱量瓶。 A.5.2.3 真空干燥箱。 A.5.3 分析步驟 稱取50mg(精確至0.0001g)試樣，置于已干燥恒重(105℃±2℃，30min)的稱量瓶中。將試樣在稱量瓶中均勻鋪開。在105 ℃±2 ℃?真空壓力低于2.67kPa條件下干燥至恒重。將稱量瓶置于干燥器中冷卻至室溫，稱量。 A.5.4 結果計算 試樣干燥減量的質量分數ω2，按式(A.2)計算，以%表示。 (A.2) 式中： m1——干燥前帶有樣品的稱量瓶的質量，單位為克(g)； m2——干燥后帶有樣品的稱量瓶的質量，單位為克(g)； m0——干燥后稱量瓶的質量，單位為克(g)。 計算結果保留2位有效數字。 取平行測定結果的算術平均值為測定結果，兩次平行測定結果的絕對差值不大于1.0%。 A.6 有關物質 A.6.1 方法原理 試樣用流動相溶解后，采用液相色譜儀檢測，峰面積比較法定量。 A.6.2 試劑和材料 A.6.2.1 氯胺T。 A.6.2.2 甲醇。 A.6.2.3 磷酸氫二鈉。 A.6.2.4 磷酸。 A.6.2.5 鹽酸。 A.6.2.6 磷酸氫二鈉溶液：0.028 mol/L。稱取10.03g 十二水合磷酸氫二鈉，加水溶解并定容至1000mL。 A.6.2.7 鹽酸溶液：0.05mol/L。取4.5mL 鹽酸，加水至1000mL，混勻。 A.6.2.8 氯胺T 溶液：0.1 %。量取0.1g氯胺T，加水溶解并定容至100mL。 A.6.3 儀器和設備 A.6.3.1 天平：感量0.0001g。 A.6.3.2 高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。 A.6.4 分析步驟 A.6.4.1 試樣溶液：稱取試樣10mg于10mL 容量瓶中，用流動相溶解并定容至刻度，混勻。 A.6.4.2 對照溶液：精密量取1mL 試樣溶液于100mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，混勻。 A.6.4.3 系統適用性溶液：稱取試樣25 mg 于25 mL 容量瓶中，加10 mL 水溶解樣品，加入5 mL0.1% 氯胺T 溶液?0.5mL 0.05mol/L 鹽酸溶液，用水稀釋至刻度，混勻，靜置5 min。準確量取1 mL上述溶液于10mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，混勻。 A.6.4.4 靈敏度溶液：準確量取1mL 對照溶液于10mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，混勻。 A.6.5 參考色譜條件 A.6.5.1 色譜柱：C18色譜柱(柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm)，或其他等效色譜柱。 A.6.5.2 流動相：取260mL 甲醇和740mL 磷酸氫二鈉溶液(A.6.2.6)混勻，用磷酸調節pH 至3.5。 A.6.5.3 柱溫：25 ℃。 A.6.5.4 檢測器波長：361nm。 A.6.5.5 進樣量：10μL。 A.6.5.6 運行時間：氰鈷胺主峰保留時間的3倍。 A.6.6 系統適用性試驗 采用新制備的溶液，且避免強光照射。按照液相色譜儀操作規程操作，取系統適用性溶液(A.6.4.3)和靈敏度溶液(A.6.4.4)分別注入液相色譜儀中，觀察色譜圖。 系統適用性溶液中應出現氰鈷胺峰與一個降解產物峰(相對保留時間約為1.4)，二者的分離度應大于2.5，靈敏度溶液中主峰的信噪比應大于3。 A.6.7 測定 系統適用性合格后再進行試樣檢測。依次注入試樣溶液(A.6.4.1)?對照溶液(A.6.4.2)進行測定。 A.6.8 結果計算 試樣中有關物質的含量ω3，按式(A.3)計算，以%表示。 (A.3) 式中： A1——試樣溶液除主峰以外的所有雜質峰面積之和； A2——對照溶液主峰面積。 A.6.9 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過其算術平均值的10%。 A.7 丙酮 A.7.1 試劑和材料 丙酮：色譜純。 A.7.2 儀器和設備 A.7.2.1 天平：感量0.001g。 A.7.2.2 氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器(FID)和頂空進樣器。 A.7.3 參考色譜條件 A.7.3.1 色譜柱：毛細管柱(柱長60m，內徑0.32 mm，膜厚1.6μm，固定液為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷)，或其他等效色譜柱。 A.7.3.2 載氣：氮氣(純度大于99.99%)。 A.7.3.3 載氣流量：1.5mL/min。 A.7.3.4 柱溫：40 ℃保持10min后，以20 ℃/min的速率升溫至240 ℃，保持2min。 A.7.3.5 進樣口溫度：140 ℃。 A.7.3.6 檢測器溫度：250 ℃。 A.7.3.7 檢測器氣體流量：空氣，400mL/min；氫氣，60mL/min；尾吹氣，25mL/min。 A.7.3.8 進樣量：1.0mL。 A.7.3.9 分流比：1∶50。 A.7.4 參考頂空條件 A.7.4.1 頂空瓶平衡溫度：80 ℃。 A.7.4.2 平衡時間：45min。 A.7.4.3 定量環溫度：90 ℃。 A.7.4.4 傳輸線溫度：100 ℃。 A.7.5 分析步驟 A.7.5.1 空白溶液制備 移取5.0mL 水，置于頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋。 A.7.5.2 標準溶液制備 稱取0.1g丙酮(精確至0.001g)于已預加80mL 水的100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，得到1000mg/L 的丙酮標準儲備液。吸取適量的丙酮標準儲備液于10 mL 容量瓶中，用水配制成10mg/L?20mg/L?50mg/L?100mg/L?200mg/L 的丙酮標準使用溶液，取上述系列溶液各5.0mL，分別置于頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋。 A.7.5.3 試樣溶液制備 稱取試樣0.1g (精確至0.001g)于10 mL 容量瓶中，用水溶解后定容至刻度，搖勻，得到試樣溶液。移取該溶液5.0mL 置于頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋，備用。 A.7.5.4 測定 在參考條件下(A.7.3和A.7.4)，分別對空白溶液?標準系列溶液和試樣溶液進行測定，記錄丙酮的峰面積值。丙酮的氣相色譜圖參見附錄C 中的圖C.1。以標準系列溶液色譜圖中丙酮的峰面積值為Y軸，以對應溶劑濃度(mg/L)為X軸，繪制標準曲線，得到丙酮標準曲線。根據試樣溶液色譜圖中丙酮的峰面積值，從標準曲線求得試樣溶液中丙酮的濃度(mg/L)。 A.7.6 結果計算 試樣中丙酮的含量ω4，按式(A.4)計算。 (A.4) 式中： c——從標準曲線求得的試樣溶液中丙酮的濃度，單位為毫克每升(mg/L)。 V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL)。 m——試樣的質量，單位為克(g)。 A.7.7 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過其算術平均值的10%。 附 錄 B 氰鈷胺標準品紅外光譜圖 氰鈷胺標準品的紅外光譜圖如圖B.1所示。 透過率/% 波數/cm-1 圖C.1 氰鈷胺標準品的紅外光譜圖 附 錄 C 丙酮氣相色譜圖 丙酮的氣相色譜圖如圖C.1所示。 響應值/pA 圖C.1 丙酮的氣相色譜圖